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TRAVAUX DIRIGES: BASES FONDAMENTALES DE LA BIOLOGIE MOLECULAIRE

mars 10th, 2015 by Dr Djitie Kouatcho

TRAVAUX DIRIGES  ET PRATIQUES DE BASES FONDAMENTALES DE LA BIOLOGIE MOLÉCULAIRE L2BO
 

Télécharger fiche pour le TP ici:  tp-bf-biologie-moleculaire-l2bo-2015.pdf

PARTIE1 : Questions de cours
1- Quelle différence faites-vous entre une base purique et une base pyrimidique ? donnez des exemples dans chaque cas.
2- Donnez les constituants d’un monomère d’ARN puis représentez ses différentes bases azotées.
3- Quelle différence faites-vous entre un nucléoside et un nucléotide ?
4- Faites la différence entre les pentoses de l’ADN et de l’ARN ?
5- Dans un tableau, faites la différence entre une molécule d’ADN et d’ARN (composition, structure, fonction).
6- Définir : réplication, transcription, traduction, maturation de l’ARNm, translocation, promoteur.
7- Citez et donner la fonction des 05 principales enzymes intervenant dans le mécanisme de la réplication.
8- Citez et décrivez les différentes étapes de la transcription ?
9- En quoi consiste la maturation de l’ARNm chez les procaryotes et eucaryotes ?
10- Quelles sont les caractéristiques du code génétique ?
11- Quelles peuvent être les fonctions d’un codon ?
12- Définir mutation. Citer et expliquer les différents types de mutation.
13- Donner le rôle et le principe des techniques de Biologie Moléculaire suivantes.
PCR, Electrophorèse, séquençage, Southern Blot.
14- Donner les étapes de la PCR ainsi que les constituants nécessaires pour sa réalisation.
15- Quels sont les éléments nécessaires à la synthèse protéique ? donner le rôle de chacun d’eux?

PARTIE 2 : Exercices d’application
Exercice 1
La séquence d’un peptide bactérien est déterminée par la séquence suivante dans l’ADN :
5’PTTAAGCTAAGTAATTGCTACCAT3’OH
a) donner la séquence de l’ARNm correspondant en précisant la nature des extrémités
b) à l’aide du code génétique, indiquer la séquence du peptide obtenu après traduction.
c) en précisant la nature de ses deux extrémités, donner la séquence de l’anticodon correspondant à l’avant dernier acide aminé synthétisé.
d) trouve-t-on une illustration de la dégénérescence du code génétique dans la chaine traduite ? pourquoi ?
e) Une mutation ayant transformé le T (position 15 et en gras dans la séquence) en G, quel sera la nouvelle séquence peptidique traduite ? en déduire le type de mutation ?

Exercice 2
L’action de BamHI sur un plasmide donne 4 fragments ( ABCD) après electrophorèse sur gel d’agarose.
a. quelle est la fonction de BamHI ?
b. que signifie l’obtention de ces 4 fragments?
c. representer l’electrophoregramme :
- si les fragments sont tous de tailles differentes
- si deux de ces fragments sont de tailles égales.
d. Que signifirait la présence d’une seule bande sur l’électrophoregramme ? en deduire la carte de restriction de ce plasmide.

Exercice 3 : maturation des ARNm
Ci-joint une représentation schématique de la structure d’un gène isolé d’un échantiollon.
(E=exon et I=intron)

gene.JPG

a- nommer et définir l`élément ( ?) en amont du 1er exon
b- que représente le symbole // après l’exon 4 ?
c- quelle différence faites-vous entre exon et intron
d- représenter sur le schéma la position et l’écriture du codon d’initiation et du codon stop.
e- décrire le comportement du ribosome sur le codon initiateur, l’intron i3 et le codon stop pendant la synthèse des protéines.
f- schématiser les structures du pré-ARNm et de l’ARNm mature formés à partir de ce gène.
g- une mutation survient au niveau du site d’épissage situé au début de l’intron 3 le rendant
inconnu par la machinerie d’épissage. Donner la structure de l’ARNm qui dérivera de ce gène.
h- Quel est la conséquence si cette mutation est non-sens ?
Exercice 4 :
Et si on ne voulait plus laver le ‘Ndolè’
Exercice 5 :
Vous voulez étudier un fragment d’ADN de 536 paires de base correspondant à la région
régulatrice située en amont (5′) du gène de votre protéine favorite. Cette séquence est la
suivante :
Brin sens : 5′ GATTCAGGAGATTCACAC- -500 nucléotides- -TCGGTACAGCTATACAGG 3′
Brin antisens: 3′ CTAAGTCCTCTAAGTGTG- -500 nucléotides- -AGCCATGTCGATATGTCC 5′

Parmi les 8 amorces suivantes quelles sont les 2 amorces (à désigner par leurs lettres) qui permettront l’amplification par PCR de ce fragment ?
a) 5′GATTCAGGAGATTCACAC3′
b) 5′CTAAGTCCTCTAAGTGTG3′
c) 5′CACACTTAGAGGACTTAG3′
d) 5′TCGGTACAGCTATACAGG3′
e) 5′AGCCATGTCGATATGTCC3′
f) 5′GTGTGAATCTCCTGAATC3′
g) 5′CCTGTATAGCTGTACCGA3′
h) 5′GGACATATCGACATGGCT3

Exercice 6 :
SOIT UNE SÉQUENCE CODANTE DE 18NUCLEOTIDES.
transcription1.JPG

a. déterminer le sens de transcription. Justifier.
b. orienter l’ARNm, les deux brins de la molécule d’ADN et compléter le tableau.
c. orienter la chaîne polypeptidique en précisant les extrémités NH2et COOH-terminales.

Bon travail




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